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维生素D受体基因多态性与慢性肾衰继发性甲旁亢的关系

来源:| 作者:| 发布时间:2015年09月11日

探讨维生素d受体(vdr)基因b/b多态性与慢性肾功能衰竭(crf)继发性甲状旁腺功能亢进的关系。 方法:慢性肾衰患者108例,分为二组①高全段甲状旁腺素(ipth)组:61例,ipth>60pmol/l;②低ipth组:47例,ipth<12pmol/l。正常健康对照59例。采用酚氯仿法提取外周血dna,多聚酶链反应法扩增vdr基因第8内含子目的片段,bsm i酶消化pcr产物,经2%琼脂糖溴乙锭凝胶电泳,紫外灯下观察结果。 结果:维生素d基因型的分布在正常人群为bb型9例(15.2%),bb26例(44.1%),bb型24例(40.7%);在慢性肾衰高ipth组bb型6例(9.8%),bb型22例(36.1%),bb型33例(54.1%);低ipth组bb型11例(23.4%),bb型20例(42.6%),bb型16例(34.0%)。正常人群与crf患者bb、bb、bb基因型及b、b等位基因分布无明显差异(p>0.05);而crf高ipth组与低ipth组相比,bb基因型和b等位基因的频率明显减低(p<0.05);bb基因型和b等位基因的频率明显升高(p<0.05)。 结论:中国汉族crf患者不同ipth水平与vdr基因b

随着透析事业的发展,慢性肾功能衰竭(crf)患者存活时间不断延长,继发性甲状旁腺功能亢进症(shpt)的发病率越来越高,严重影响慢性肾衰患者的长期生存和社会复归,引起人们广泛关注。shpt的确切机制尚未完全明了,尤其是shpt的遗传背景知之甚少。众所周知,1,25-二羟维生素d3(calcitriol)和维生素d受体(vdr)的异常与shpt的发生关系密切。calcitriol必须通过与细胞核内的vdr结合,才能发挥作用。vdr基因3?非翻译区通过bsm i酶切可产生b、b二种等位基因,bb、bb、bb型三种基因型[1]。不同基因型vdr表达及vdr功能存在差异[1~3]。最近的研究显示它参与调节甲状旁腺细胞的分化和功能[4]。慢性肾衰继发性甲状旁腺功能亢进与vdr基因型的关系也开始受到国外学者的关注,国内尚未见有关报道。本研究旨在探讨中国汉族人群vdr基因多态性与crf继发性甲状旁腺功能亢进的关系。

1 对象和方法

1.1 研究对象 在我院住院确诊和(或)维持性透析的365例crf患者中,根据血清全段甲状旁腺素(ipth)水平,选择ipth>60pmol/l和<12pmol/l的108例患者作为本组研究对象,并按ipth水平分为①高ipth组:61例,年龄20~80(52.2±13.8)岁,男43例,女18例,ipth>60pmol/l,均用罗钙全治疗,透析<6年,血钙>2.2mmol/l;②低ipth组:47例,年龄28~75(50.9±16.4)岁,男35例,女12例,血清ipth<12pmol/l,未用罗钙全,透析>2年,血钙<2.75mmol/l,血铝<100μg/l。crf组中不包括糖尿病患者。正常健康对照组:59例,年龄18~72(49.7±17.2)岁,男41例,女18例,无心、肝、肾及内分泌、代谢疾病。研究对象均来自中国汉族人群,无血缘关系。

1.2 研究方法

1.2.1 vdr基因多态性分析 (1)dna的提取:采外周静脉血2ml,酸性柠檬酸葡萄糖混合溶液(acd)抗凝。用细胞裂解液、蛋白酶k、sds破碎红细胞和白细胞,解聚核蛋白,然后酚和氯仿法抽提dna,乙醇沉淀。(2)检测vdr基因多态性:用多聚酶链反应(pcr)法扩增vdr基因第8内含子目的片段。引物序列为:正向5-caaccaagactacaagtaccgcgtcagtga-3,反向。taq酶购自promega公司,bsm i酶购自boehringeer mannheim公司。pcr反应总体积50μl。pcr条件为94℃变性50s,55℃退火50s,72℃延伸1min,35个循环,运用pe480dna合成仪。pcr产物20μl加5u bsm i酶消化。酶切产物经2%琼脂糖溴乙锭凝胶电泳,紫外灯下观察结果。出现800、650bp和150bp三条区带者为bb型,仅有800bp区带者为bb型,仅有650、150bp两条区带者为bb型

维生素D受体基因多态性与慢性肾衰继发性甲旁亢的关系

已知vdr基因多态性参与调节甲状旁腺细胞的分化和功能。非家族性原发性甲状旁腺功能亢进症患者vdr基因bb型及b等位基因频率高[4]。1997年elvira等[7]对162例欧洲白人crf患者的研究,发现无shpt者vdr基因bb型分布频率高。1998年fukuda等[8]对877例日本crf维持性透析患者的研究结果显示,bb型患者的ipth水平明显低于bb型患者。

由于crf患者shpt的程度存在很大的差别,一些患者出现严重的不可控制的高pth血症、纤维囊性骨炎,而另一些则仅有轻、中度pth升高,甚至pth正常或低于正常,发生低转运骨病。而这种差异与年龄、性别、透析时间和方式、血钙、血磷、血铝水平、罗钙全治疗等有关。为减少这些因素对本研究结果的影响,我们剔除高ipth组中透析>6年,血钙<2.2mmol/l者;低ipth组中透析<2年,血铝>100μg/l,血钙>2.75mmol/l的患者,且各组年龄、性别无差异。本研究发现,crf患者中高ipth组bb基因型和b等位基因频率明显低于低ipth组(p<0.05);bb基因型和b等位基因频率明显高于低ipth组(p<0.05)。本研究结果与elvira[7]、aterini[9]和nagaba[10]等的研究结果相似,提示crf患者甲状旁腺功能的不同表现可能至少部分与vdr基因多态性背景有关。

该基因多态性影响甲状旁腺激素的合成和分泌的确切分子机制尚在探讨之中,目前认为,vdr基因多态性可能通过干扰vdr基因mrna的剪接与表达,使mrna的质量或稳定性受到影响,从而产生维生素d受体蛋白数目或活力上的轻微差异,进一步通过维生素d受体蛋白与其靶基因间的反式作用,最终产生一系列的效应。有实验证明vdr基因bb型转录活性高、mrna稳定、翻译的蛋白质水平高,bb型则相对低[1,2,7]。在bb基因型crf患者calcitriol可能会更好地发挥抗甲状旁腺细胞增殖和抑制pth合成的作用。

另外,本研究显示中国汉族正常人群crf患者bb、bb、bb基因型及b、b等位基因分布差异不明显(p>0.05);bb型频率分别为15.2%和15.7%,与elvira等[7]报告的13.4%和19.7%相近,但与nagaba等[10]报告的血液透析患者bb型6.2%存在较大差别。这可能是由于不同人种或不同群体间的差异,也可能与取样多寡有关。


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